黃曲霉PCR試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，樣本中黃曲霉毒素和此抗原競爭黃曲霉毒素抗體，同時黃曲霉毒素抗體與酶標二抗相結(jié)合，經(jīng)底物顯色，樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中黃曲霉毒素的含量。
黃曲霉PCR試劑盒的檢測原理：
它是一種固相直接競爭酶聯(lián)分析測定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗黃曲霉毒素的高親和力抗體，這種抗體和黃曲霉毒素的四種亞型都能發(fā)生交叉反應(yīng)。
利用甲醇提取樣品中的黃曲霉毒素，把提取的樣品和HRP標記的黃曲霉毒素混勻并加入對應(yīng)的孔檢測。酶標記毒素與標準品或者樣品中黃曲霉毒素競爭與包被在微孔底部的抗體結(jié)合。
孵育一段時間后，倒出孔里的液體，清洗后加入顯色底物，在酶的作用下孔里將會出現(xiàn)藍色。顯色顏色的深淺與結(jié)合物的量成正比例的關(guān)系，與標準品或樣品中AFM的量成反比例關(guān)系。所以，標準品或樣品中的AFM濃度越高，顯色的藍色將會越淺。加入酸，終止反應(yīng)，底物顏色由藍色變?yōu)樽攸S色。
黃曲霉PCR試劑盒的檢測程序：（注意標準及樣品做平行試驗，可以提高檢測的準度及度）
1．開始實驗前要求試劑及樣品萃取液達到室溫。
2．取適量的孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條，與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3．入酶標記物到微孔中。
4．入標準品及樣品到相應(yīng)的孔中，注意使用吸頭防止交叉污染
5．入抗體溶液到微孔中，輕微震蕩微孔板。
6．室溫下孵育10分鐘。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注滿蒸餾水，然后到掉，重復(fù)4次，共五次洗板。
8．后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干。
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