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    首頁   >    技術文章   >   ADH測定操作

    ADH測定操作

    點擊次數:566  更新時間:2023-08-17
    3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)生化檢測試劑盒是糖酵解途徑的關鍵酶,與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關。
    測定意義:
    GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途徑的關鍵酶,與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關,在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
    測定原理:
    3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、無機磷和NAD,340nm處測定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低。
    需自備的儀器和用品:
    分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。粗酶液提取:
    1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
    2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
    3、血清等液體:直接測定。
    ADH測定操作: 
    1. 分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到340nm,蒸餾水調零。
    2. 試劑三在25℃水浴中保溫30min。
    3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。
     
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