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    偷死野田村病毒RT-LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):1030  更新時(shí)間:2021-03-01

    偷死野田村病毒RT-LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟:
    方法
    1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
    10×PCR buffer                   
    5 μl     dNTP mix (2mM)             
    4 μl     引物1(10pM)                 
    2 μl     引物2(10pM)                 
    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl) 
    1 μl      加ddH2O至 50 μl 
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
    3:PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
    4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

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